La ADN polimerasa es la enzima responsable de la formación de una hebra de ADN a partir de una hebra de ADN molde. Para que la ADN polimerasa inicie la formación de una nueva hebra de ADN, necesita una hebra «iniciadora» corta, llamadacebador. El cebador debe estar unido a una zona del ADN molde al que es complementario.

Un diagrama que muestra cómo la ADN polimerasa sintetiza ADN nuevo durante la PCR. El primer paso está etiquetado con: El ADN bicatenario se desnaturaliza calentándolo a 95 grados centígrados. La imagen adjunta muestra dos hebras de ADN complementarias que se han separado, con la hebra superior con el extremo principal 3 a la izquierda y la hebra inferior con el extremo principal 5 a la izquierda. Se describe el siguiente paso: a aproximadamente 60 grados centígrados, los cebadores se hibridan con bases complementarias que flanquean la región de interés. En la hebra superior, un imprimador largo de 4 pares de bases se adhiere al extremo 3 principal del soporte, que está a la izquierda. En la hebra inferior, una imprimación de 4 pares de bases se une al extremo principal de 3, que está en el lado derecho. El siguiente paso: a 72 grados centígrados, la polimerasa Taq extiende la molécula de ADN monocatenario creando un nuevo ADN bicatenario. Se agregan nuevos pares de bases en la dirección principal de 5 en cada hebra. El paso final: el proceso se repite durante 25 a 35 ciclos para amplificar suficiente material para la visualización. La imagen muestra dos pares de ADN de doble hebra, y cada par consta de una hebra de ADN nuevo y una hebra de ADN original.

Síntesis de una hebra de ADN nueva

洛杉矶与polimerasa喝水anadir调查nucleotidos extremo 3' de un cebador unido al ADN molde porque este extremo tiene un grupo hidroxilo libre (-OH) que puede reaccionar con el grupo fosfato del nucleótido entrante. Por lo tanto, se dice que la nueva cadena de ADN se sintetiza en la dirección 5'→3'. La hebra de ADN nueva será complementaria a la hebra molde y antiparalela a ella.

La fabricación de una ADN polimerasa termoestable (Taq) para PCR

La ADN polimerasa se origina en organismos vivos y es más funcional en condiciones fisiológicas. Por lo tanto, la ADN polimerasa de la mayoría de los organismos no funcionaría bien en una reacción de PCR porque la mayoría de las polimerasas se degradan a 90oC. Si dicha polimerasa se va a utilizar para la PCR, sería necesario añadir una nueva ADN polimerasa después de cada ciclo. Por suerte, Thomas Brock descubrió una ADN polimerasa adecuada: la polimerasa Taq. Esta ADN polimerasa se aisló de la bacteriaThermus aquaticus, que se encuentra en las aguas termales del Parque Nacional Yellowstone. La polimerasa Taq es activa a temperaturas de hasta 95oC, lo que asegura que se puedan realizar múltiples ciclos de PCR de una sola vez y que no haga falta polimerasa adicional.

Cebadores

Nucleótidos

Resumen de la teoría

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