网关技术提供了一条快速、高效的路径克隆．这项技术依赖于从噬菌体lambda中改良的重组酶的使用。这种病毒利用这些酶将其基因组插入宿主DNA中。Gateway克隆系统利用它们实现高效、位点特异性重组。这个系统的第二个有用的特征是它对被称为clonase的酶的识别位点附上的网站，并使用不同的类型向量．
观看下面的动画来了解Gateway的反应。
BP和LR反应
BP和LR反应是不同DNA片段在构造中从一个地方移动到另一个地方的方式。在BP反应过程中，attB和attP位点重新结合。这个反应在两条链之间交换DNA，创建一个attL和一个attR位点。在LR反应中，attL和attR位点类似地重组，生成attB和attP位点。有数量有限的att网站，用数字标注。这意味着组合的数量有限。每个站点只在组内重组:例如，attL1站点将只与attR1站点重组，生成attB1和attP1站点。这些位点的定位也是特定的，并且基因结构是高度可预测的。通过选择合适的末端、反应和矢量，就可以得到理想的结构。
向量类型
可回收的att站点非常适合创建向量库，可以用来有效地组合不同的电路部分．
•表达载体（AmpR):表达克隆是网关反应的最终产物。这是一个完整的质粒，可以进行转化了。
•捐赠者向量（ccdB,菅直人R):供体载体提供了创造进入克隆的主干。供体载体通常以pDONR开头。这些质粒携带着位于ccdB基因两侧的attB或attP位点，以及卡那霉素抗性基因。
•输入向量（菅直人R):输入载体由供体载体和带有匹配位点的DNA序列创建。这些有趣的序列通常是由聚合酶链反应，使用含有att位点的引物。进入载体包含感兴趣序列侧面的attL或attR位点，以及卡那霉素抗性基因。入口矢量非常适合于电路部件库。
•目标向量（ccdB,AmpR):目的向量为表达克隆提供主干。目标向量通常用以pDEST开头的名称表示。这些质粒包含ccdB基因、attL或attR位点以及氨苄西林抗性基因。目的载体还包含特定宿主复制的起源和额外的DNA基序。
选择
在Gateway克隆过程的不同步骤中选择感兴趣的向量是非常重要的。对于选择，网关系统依赖于两个抗生素抗性和ccd阳性选择的B基因。抗生素耐药性使转化细胞能够在含有抗生素的培养基上生长，这些抗生素可以杀死未转化的细胞。
ccdB编码一种阻止DNA复制的细菌毒素。Gateway克隆的所有主干(pDEST和pDONR)都携带这种基因，只有细菌携带另外一种基因ccd将这些质粒转化后，基因就会生长。