Figura 1:Horno cerrado en donde la columna se puede almacenar en un ambiente de temperatura controlada.
La temperatura es un factor importante a la hora de separar compuestos mediante HPLC. La columna se puede colocar dentro de un horno cerrado donde la temperatura puede ser regulada.
Termodinámica en HPLC
La retención de un soluto en un sistema cromatográfico se determina, en primer lugar, por la magnitud del coeficiente de distribución del soluto entre las dos fases y, en segundo lugar, por la cantidad de fase estacionaria disponible para el soluto, para su interacción. Lo importante en este punto es que la constante de equilibrio es una magnitud termodinámica. Por lo tanto, se aplica la siguiente relación termodinámica:
Donde ∆G es la energía libre estándar de adsorción de la fase estacionaria, ∆H es la entalpía estándar de adsorción de la fase estacionaria, ∆S es la entropía estándar de adsorción de la fase estacionaria y T es la temperatura del sistema.
Donde K es la constante de equilibrio para la distribución entre la fase móvil y estacionaria, R es la constante de los gases, ln es el logaritmo neperiano yk' es el factor de capacidad. Como se ve en la ecuación anterior, la energía libre de Gibbs (∆G) se puede correlacionar con el factor de capacidad (k'). Generalizando la ecuación de la energía libre de Gibbs, podemos medir el efecto del cambio de temperatura en el factor de capacidad.
Ventajas de la ejecución a mayor temperatura
干草瓦利亚斯ventajas de la separacion realizar de compuestos a mayor temperatura. Además de disminuir los tiempos de ejecución, un aumento de temperatura puede tener otros efectos beneficiosos. A medida que aumenta la temperatura, la viscosidad de la fase móvil disminuye, lo que se traduce en presiones más bajas. Una menor viscosidad de la fase móvil también mejora la difusión en el sistema cromatográfico, dando lugar a picos más estrechos. Simultáneamente, los tiempos de retención menores generarán picos más estrechos. Picos más estrechos implica picos más altos, suponiendo que poseen la misma masa de muestra en la columna y, por tanto, límites de detección más bajos. Y si te satisface trabajar a la presión inicial, puedes reducir aún más el tiempo de ejecución aumentando el caudal con separaciones isocráticas hasta alcanzar la presión original.
El aumento de la temperatura también incrementa la solubilidad del compuesto. Cuando un compuesto tiene una baja solubilidad, puede precipitar y obstruir la columna. Esto puede evitarse aumentando la temperatura. Sin embargo, hay que tener en cuenta que la estabilidad de los compuestos depende de la temperatura, especialmente en los compuestos biológicos. Cuando la temperatura es demasiado alta, estos compuestos pueden degradarse y no se podrá conseguir una buena separación y medición.
Por lo tanto, en muchos casos, un aumento de temperatura puede tener múltiples beneficios si no se producen cambios adversos en la selectividad.