Laclonación molecularbasada en enzimas de restricción es el método «clásico» de clonación y sigue siendo una de las técnicas más populares. En principio, el ensamblado de plásmidos se compone de los siguientes pasos:
Digestión con enzimas de restricción:El vector plásmido cerrado circular y el fragmento del gen de interés se adhieren a una o másenzimas de restricción.
Ligación:Fragmentos de ADN con voladizos compatibles se ligan en unvector plásmidoalineado.
Se consiguen至少proporciones de exito cuandose utilizan fragmentos de ADN con voladizos 5' o 3' que ensamblando fragmentos de ADN con extremos romos.