并不是所有的基因都在所有的细胞中持续表达。细胞必须将DNA序列转录成mRNA才能产生编码的蛋白质。因此，基因表达水平与 mRNA 水平相对应。基因表达可通过逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 检测。RT-PCR 包括以下步骤：

• 利用逆转录酶将 RNA 转化为 cDNA

• 使用 PCR 扩增 cDNA

图 1 ：从 mRNA 模板创建 cDNA 的步骤。**使用 Oligo (dT) 引物，将 mRNA 反转录为 cDNA，然后水解 RNA 链。 mRNA 比 DNA 更脆弱，无法通过 PCR 扩增。因此，mRNA 被转换为互补的DNA (cDNA)。 cDNA 是从信使 RNA 分子合成的 DNA。cDNA 的合成被称为逆转录酶的酶催化，该酶使用 RNA 作为 DNA 合成的模板。逆转录酶最初是从逆转录病毒中发现并分离的。这些病毒包含一个 RNA 基因组。因此，病毒需要产生其基因组的 cDNA 副本才能与宿主细胞的分子机制兼容。

RT-PCR 反应包括以下步骤：

• oligo (T) 片段作为引物，与每个 mRNA 的 3’ poly(A) 尾结合。

• 逆转录酶以 RNA 为模板合成 cDNA 链。

• 通过提高温度分离得到 RNA-cDNA 混合物。

• 基因特异性引物与其互补序列重组。

• DNA 聚合酶从引物结合位点开始产生互补的 DNA 链。

• 通过提高温度来分离这些链，重复 PCR 周期。

在 RT-PCR 反应结束时，如果基因被表达，将会有数十亿个相关基因的拷贝。

DNA 拷贝的数量可以通过凝胶电泳可视化。