基于尿嘧啶切除的克隆(USER)是一种将DNA片段克隆到线性化的载体中，从而在不使用连接酶的情况下获得稳定杂交产物的方法(图1)3 '悬臂互补通过在每个PCR片段上放置一个尿嘧啶残留来生成底漆用于扩增目标DNA。然后对得到的PCR产物进行处理特定的酶粘结力端部在设计的熔化温度下退火。

图1所示。用户克隆概述。

除了将DNA片段插入到线性化的载体中，这种方法还用于将任何类型的突变(插入、缺失、不匹配)引入到基因或载体中，以及进行组合组装。

USER克隆的主要优点是简单性。操作简便，不需要使用连接酶，由于重叠序列短，引物设计比其他DNA组装技术更容易。