FIXa ELISA是基于抗凝血酶III (ATIII)的特异性亲和力为FIXa，但不是修复．
本方法是一种杂质定量检测方法，用于测定FIX和FIXFc原料药和制剂样品中活化因子IX (FIXa)的含量。
96孔微滴度板涂有单克隆抗抗凝血酶III抗体。
涂布后，溶液被丢弃，印版是阻塞在PBS中加入5% (w/v)的BSA溶液。1小时后丢弃封闭溶液，加入ATIII并孵育1小时，以便使ATIII与包被的抗ATIII抗体结合。
未粘合的材料被随后的洗涤除去。然后将标准品、对照品和待测品加入微量滴定板中。样品孵育2小时，在加入与之偶联的抗人FIX抗体之前，第二次冲洗板辣根过氧化物酶(合)．过量的检测抗体(HRP结合物)在一小时孵育后用第三次清洗去除。
通过添加的方式检测HRP绑定的数量三甲/过氧化氢试剂，它被酶转化成蓝色的产物，然后可以在620到650 nm读取。加入0.25 M的硫酸，10分钟后停止反应，颜色由蓝色变为黄色，吸光度增加2 - 3倍，用650 nm的参考滤光片在450nm下测定。颜色强度与样品中FIXa的量成正比，这是根据FIXa决定的标准．