La constante de Michaelis, Km, es un parámetro de laecuación de Michaelis-Menten. La Kmes igual a la concentración de sustrato en que la velocidad de reacción correspondiente es ½ • Vmáx. Por lo tanto, una enzima con una baja Kmalcanzará lamitad de su velocidad máximaa una baja concentración de sustrato, mientras que una enzima con una alta Kmrequiere una concentración alta de sustrato para alcanzar esta velocidad. Se ha demostrado experimentalmente que la Kmde una enzima suele parecerse一拉有限公司ncentración celular de su sustrato. En el caso de una reacción enzimática que tenga dos pasos, en la que el segundo paso limita la velocidad, Kmes aproximadamente igual a la constante de disociación del complejo ES. En este caso, una Kmbaja implica una gran afinidad por el sustrato; no obstante, esta interpretación de la Kmsolo es válida para unas cuantas enzimas [1].
Figura 1:Figura 1.a: Ecuación de Michaelis-Menten en una gráfica en la que están las velocidades iniciales con respecto a la concentración de sustrato. Cuando la concentración de sustrato es igual a Km, la velocidad de reacción es ½*Vmáx. Figura 1.b: Ilustración de la ecuación Lineweaver-Burk que muestra la transformación de dobles recíprocos de un conjunto de datos de cinética enzimática.
Ecuación de Lineweaver-Burk
Existen varios métodos para determinar la Km. El método más directo es trazar V0con respecto a [S] y usar un programa de creación de curvas para representar directamente la ecuación Michaelis-Menten. Sin embargo, algunas transformaciones permiten la determinación por regresión lineal, y estas transformaciones también son útiles al analizar la inhibición enzimática. Muchas transformaciones son posibles; no obstante, se puede obtener una sencilla al tomar el recíproco de ambos lados de la ecuación de Michaelis-Menten. Esto conduce a la siguiente expresión, conocida como ecuación Lineweaver-Burk:
1/V0= 1/vmáx+ Km/Vmáx• 1/[S]
De acuerdo con esta ecuación, una gráfica de 1/ V0en relación a 1/[S] debería formar una gráfica que muestre una línea recta con intersección en y 1/Vmáxy pendiente Km/Vmáx. Por tanto, Kmse puede obtener mediante regresión lineal. La figura 1.b muestra una ilustración de cómo interpretar la pendiente e intersecciones de una gráfica Lineweaver-Burk. [1]
Otras transformaciones
Aunque destacada, la transformación de Lineweaver-Burk no es la única opción. Por ejemplo, una gráfica de [S]/V0EnRelaciónA[s]（unagráficadehanes-woolf）无词，en estaocasiónusaremos latransformacióndelineweaver-burk。
Referencias
Lehninger, Albert L.; Nelson, David L.; Cox, Michael M. (2008).Principles of Biochemistry(5th ed.). New York, NY: W.H. Freeman and Company. ISBN 978-0-7167-7108-1.
Atkins, G.L. and Nimmo, I.A. (1975) A comparison of seven methods for fitting the Michaelis-Menten equation.Biochem. J.149, 775-777.