qPCR结果由融化曲线和一个放大图.熔化曲线显示DNA链在什么温度下熔化/分离。这是非常有用的评估,如果你正在衡量你的成绩单的放大。的放大图将每个PCR周期的荧光变化描述为log (ΔRn)。荧光穿过特定阈值的循环称为Ct值(定量循环也称为Cq)。低Ct表明有大量的转录本,因此研究的基因有高表达。Ct值高表示转录本数量少,因此基因表达量低。

首先,应该检查阴性对照是否产生了信号。如果这些水控制有信号,实验就被外来DNA污染了,结果就无效。

Livak法也被称为“Delta Delta Ct”(ΔΔCt),是目前分析qPCR数据最常用的方法。Delta Delta Ct方法对PCR有一个重要的假设,即参照基因和目标基因的扩增效率必须近似相等(设为2),具体如下:Delta Delta Ct假设每个PCR周期将准确地使样品中的材料量翻倍(扩增效率= 100%或2)标准曲线为了确保引物参考基因而我们感兴趣的基因具有相当的效率。如果效率不同,你需要设计新的引物

然后我们可以通过取2^ΔΔCt来计算两个比较序列之间基因表达的相对变化,其中2为效率设置为100%和

ΔΔCt =ΔCt(示例1)−ΔCt(样2)

ΔCt(样本)= Ct(目标)−Ct (ref),

因此

ΔΔCt = (Ct (GENEsample1)−Ct (GAPDH.obese)) ((Ct (LEP.lean) - ct (GADPH.lean))

在哪里

Ct (LEP.obese) =肥胖样本LEP的Ct值

Ct (GAPDH.obese) =肥胖样本中GAPDH的Ct值

Ct (LEP.lean) =精益样品中LEP的Ct值

Ct (GAPDH.lean) =瘦肉样中GAPDH的Ct值

如欲了解更多有关。请按以下连结标准曲线融化曲线和一个放大图

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