Delta Delta CT（ΔΔct），也称为Livak方法，是最常用的分析QPCR数据的方法。

Delta Delta CT方法对PCR进行一个重要假设，即参考基因的扩增效率和感兴趣的靶基因必须大致相等（设定为2）。具体而言，Delta Delta CT假定每个PCR循环将完全将样品中材料的量加倍（扩增效率= 100％或2）。每当使用此方法时，您需要创建一个标准曲线确保底漆参考基因而感兴趣的基因具有可比性效率。如果效率不同，您需要设计新底漆。

Delta Delta CT方法比较了在实验条件下首先在实验条件下的感兴趣基因（此处LEP）和参考基因（此处毒物）之间的表达（Δct）的差异，并分别在您的阳性对照中。

ΔCt（样本）= CT（感兴趣的基因） - CT（参考基因）

然后该方法比较实验和阳性对照样品之间的差异。

ΔΔct=Δct（实验样品） - Δct（阳性对照）

我们通过使用公式计算两种比较序列之间基因表达的相对变化2^-ΔΔct，其中2的效率设定为100％。