三个抗生素组件（3A组件）是组装两种的方法Biobricks.使用限制酶克隆。三种不同抗生素抗性允许通过抗生素对正确的组件进行有效选择。3A组件在前缀和后缀上使用限制站点来组装两部分。

有效的抗生素选择消除了需求凝胶净化和殖民地PCR.由此产生的殖民地。从理论上讲，大约97％的菌落应该是所需的组装。

方法

对于成功的组装，您需要两部分和具有不同抗生素抗性基因的骨架（图1中的黄色箭头象征）。

图1：3A汇编（attribution igem.org）

• 限制性消化

  • 左部样品用EcoRI（e）和Spei切出。

  • 用Xbai（x）和psti（p）切出右部件样品。

  • 用EcoRI（E）和Psti（P）切割质粒骨架。在图1的实施例中，使用线性化质粒骨架。或者，含有含有的质粒CCDB基因可以使用。

• 所有3个限制性摘要都被加热以加热杀死所有限制酶。

• 结扎：所有3个限制性消化产品的等摩尔量在连接反应中组合。所需的结果是左侧样本的Spei悬垂连接，用右侧部分样本的Xbai突出，导致瘢痕不能与我们任何酶切割。将新的复合部件样品连接到EcoRI和PSTI位点的结构质粒骨架中。

• 当连接转化到细胞中并在用抗生素C的平板上生长时，只有正确的施工的菌落存活。