三种抗生素组装(3A组装)是一种组装两种抗生素的方法“生物砖”使用限制性内切酶克隆．三个不同的抗生素抗性通过抗生素有效地选择正确的组件。3A装配利用前缀和后缀上的约束位点进行装配。

有效的抗生素选择消除了凝胶净化和殖民地聚合酶链反应最后的殖民地。理论上，大约97%的殖民地应该是理想的议会。

方法

要成功组装，需要两个部分和一个具有不同抗生素抗性基因的主干(图1中用黄色箭头表示)。

图1:3A组装(归属iGEM.org)

• 限制消化

  • 用EcoRI (E)和SpeI (S)剪出左侧样品。

  • 右边的零件样本是用XbaI (X)和PstI (P)裁剪出来的。

  • 用EcoRI (E)和PstI (P)切割质粒骨架。在图1的例子中，使用线性化的质粒骨架。或者含有ccdB基因可以使用。

• 所有3个限制消化器都被加热，加热杀死所有的限制性内切酶．

• 结扎三种限制性消化产物在结扎反应中结合成等摩尔的量。我们所期望的结果是将左侧样品的SpeI伸出部分与右侧样品的XbaI伸出部分连接在一起，形成一个我们的任何酶都无法切割的疤痕。新的复合材料样品在EcoRI和PstI位点连接到构建质粒的主干上。

• 当结扎转化为细胞并在含有抗生素C的平板上生长时，只有结构正确的菌落存活下来。