Un instrument CLHP typique se compose de plusieurs éléments importants. Ces composants ont des fonctions spécifiques et ont besoin les uns des autres pour que nous puissions mener à bien une expérience CLHP.
Figure 1 :Un instrument CLHP typique montrant le réservoir de phase mobile, le détecteur, la pompe, l'injecteur et le four à colonne.
Les principaux composants de la CLHP是enumeresci-dessous :
- Le réservoir de la phase mobile→. C'est l'endroit où est contenue la phase mobile. La phase mobile est normalement stockée dans des bouteilles en verre.
- Les pompes→ La fonction de la pompe est de créer une haute pression et de créer un flux de phase mobile dans le système.
- L'injecteur d'échantillon→ C'est l'endroit où l'échantillon est introduit dans le système. L'échantillon doit être sous forme liquide (solution).
- La colonne→ C'est ici que la séparation de l'échantillon a lieu. La colonne est remplie de billes que l'on appelle phase stationnaire.
- Le four régulateur→ C'est là que la colonne est conservée et que la température peut être contrôlée.
- Le détecteur→ C'est là que les analytes séparés sont identifiés et quantifiés. analytes sont identifiés et quantifiés.
- Acquisition de données→ On utilise généralement un ordinateur où les données recueillies dans le détecteur sont analysées. Le résultat de ces données peut être présenté sous forme dechromatogramme.
Démarrage de l'appareil de CLHP
Il y a plusieurs étapes à suivre avant de pouvoir effectuer une expérience de CLHP.. Les étapes principales sont décrites ci-dessous :
- La préparation de l'échantillon :
Seuls les échantillonsliquidespeuvent être introduits dans le systèmeCLHP. Par conséquent, un prétraitement de l'échantillon est nécessaire pour nettoyer les interférences et/ou dissoudre les analytes dans un solvant. Trois techniques sont généralement utilisées pour éliminer les interférences sont l'extraction, la filtration et la centrifugation.
Lorsque l'échantillon estsolide常识,德文郡变压器样品的固en solution homogène. Nous pouvons commencer par broyer l'échantillon pour en faire une poudre en utilisant un mortier et un pilon. Ensuite, nous pouvons dissoudre l'échantillon en poudre dans une solution. Pour éliminer les amas de l'échantillon qui n'est pas correctement dissous, nous pouvons faire passer la solution à travers un filtre fin (typiquement un filtre de 0,5μm). Maintenant, nous pouvons être sûrs que notre échantillon est une solution homogène et qu'il est prêt à être injecté dans un tube. homogène et prête à être injectée dans l'instrument CLHP.
- La préparation du système :
Il est important de préparer la colonne pour effectuer une analyse. Il suffit pour cela de mettre en marche la pompe et de sélectionner le débit et la température. Ensuite, il suffit d'attendre que la pression dans le système soit constante. Cela signifie que laphase mobilea atteint tous les pores de la colonne, activant ses billes, et que le système est prêt pour l'injection de l'échantillon. Il faut un certain temps pour que la phase mobile active toutes les billes, pendant ce temps le débit et la pression sont instables.
Il est très important d'avoir exactement la même configuration lorsque vous effectuez plusieurs expériences et que vous souhaitez les comparer, c'est pourquoi le conditionnement du système est une étape importante. Vous devrez répéter cette étape lorsque vous effectuerez des mesures en utilisant une autre phase mobile ou stationnaire. Lorsque vous changez la phase mobile, vous devez également rincer la tubulure (qui relie le réservoir de phase mobile à la colonne) et vous assurer qu'il ne reste plus d'ancienne phase mobile.
- La courbe d'étalonnage :
Afin d'être en mesure de déterminer la concentration des analytes dans l'échantillon, unecourbe d'étalonnageest nécessaire.
Figure 1 :Courbe d'étalonnage montrant les concentrations de l'échantillon sur l'axe des x et l'aire sous la courbe sur l'axe des y.
La courbe d'étalonnage est préparée en mesurant plusieurs concentrations créant une ligne linéaire. Ces concentrations comprennent des concentrations qui sont à la fois inférieures et supérieures à la concentration attendue de l'analyte dans l'échantillon réel. Lorsque vous ne connaissez pas la concentration de l'analyte dans l'échantillon réel, vous devez généralement préparer une courbe d'étalonnage en utilisant au moins 8 concentrations d'échantillon différentes. Lorsque vous connaissez la concentration attendue de l'analyte dans l'échantillon réel, vous pouvez réduire le nombre de concentrations d'échantillons nécessaires pour la courbe d'étalonnage.